Materjali tal-pjanti u patoġeni
Popolazzjoni tal-immappjar tal-assoċjazzjoni tas-sorgu magħrufa bħala l-popolazzjoni tal-konverżjoni tas-sorgu (SCP) ġiet ipprovduta minn Dr Pat Brown fl-Università ta 'Illinois (issa f'UC Davis).Ġie deskritt qabel u huwa ġabra ta 'linji diversi kkonvertiti għal fotoperiod-insensittività u statura iżgħar biex jiffaċilitaw it-tkabbir u l-iżvilupp tal-pjanti fl-ambjenti tal-Istati Uniti.F'dan l-istudju ntużaw 510 linja minn din il-popolazzjoni għalkemm minħabba ġerminazzjoni ħażina u kwistjonijiet oħra ta 'kontroll tal-kwalità, mhux il-linji kollha ntużaw fl-analiżi tat-tliet karatteristiċi kollha.Fl-aħħar mill-aħħar dejta minn 345 linja ntużat għall-analiżi tar-rispons chitin, 472 linja għar-rispons flg22, u 456 għar-reżistenza TLS.B. cookeirazza LSLP18 inkisbet minn Dr Burt Bluhm fl-Università ta 'Arkansas.
Kejl tar-rispons MAMP
F'dan l-istudju flg22 intużaw żewġ MAMPs differenti, (katalgu Genscript # RP19986), u chitin.Il-pjanti tas-sorgu tkabbru f'inserzjonijiet imqiegħda fuq flats mimlija bil-ħamrija (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) fis-serra.Il-pjanti ġew mogħtija l-ilma l-ġurnata qabel il-ġbir tal-kampjuni biex tiġi evitata umdità żejda tal-weraq fil-ġurnata tal-ġbir.
Il-linji ġew randomised u, għal raġunijiet loġistiċi, tħawlu f'lottijiet ta '60 linja.Għal kull linja, tħawlu tliet 'qsari' b'żewġ żrieragħ għal kull linja.Lottijiet sussegwenti tħawlu hekk kif il-lott preċedenti kien ġie pproċessat sakemm il-popolazzjoni kollha kienet ġiet evalwata.Twettqu żewġ ġiri sperimentali għaż-żewġ MAMPs b'ġenotipi re-randomizzati f'kull waħda miż-żewġ ġirjiet.
Assays ROS twettqu kif deskritt qabel.Fil-qosor, għal kull linja, ġew imħawla sitt żrieragħ fi 3 qsari differenti.Min-nebbieta li rriżultaw, intgħażlu tlieta bbażati fuq l-uniformità.Nebbieta li dehru mhux tas-soltu jew kienu sinifikament ogħla jew iqsar mill-maġġoranza ma ntużawx.Erba 'diski tal-weraq ta' dijametru ta '3 mm ġew imnaqqsa mill-aktar parti wiesgħa tar-raba' werqa ta 'tliet pjanti differenti tas-sorgu ta' 15-il jum.Diska waħda għal kull werqa minn żewġ pjanti u żewġ diski minn pjanta waħda, bit-tieni diska ssir il-kontroll tal-ilma (ara hawn taħt).Id-diski ġew imqiegħda f'wiċċ l-ilma individwalment fuq 50 µl H20 fi pjanċa sewda ta '96 bir, issiġillati b'siġill tal-aluminju biex tiġi evitata l-espożizzjoni għad-dawl, u miżmuma f'temperatura tal-kamra matul il-lejl.L-għada filgħodu saret soluzzjoni ta’ reazzjoni bl-użu ta’ sonda kimiluminixxenti ta’ 2 mg/ml L-012 (Wako, katalgu # 120-04891), 2 mg/ml perossidasi tar-ravanell (Tip VI-A, Sigma-Aldrich, katalgu # P6782), u 100 mg/ml Chitin jew 2 μM ta' Flg22.50 µl ta' din is-soluzzjoni ta' reazzjoni ġew miżjuda ma' tlieta mill-erba' bjar.Ir-raba 'bir kien kontroll finta, li miegħu ġiet miżjuda s-soluzzjoni ta' reazzjoni eskluża l-MAMP.F'kull platt ġew inklużi wkoll erba' bjar vojta li fihom ilma biss.
Wara li żiedet is-soluzzjoni ta 'reazzjoni, il-luminexxenza ġiet imkejla bl-użu ta' qarrej tal-mikroplate multi-detection SynergyTM 2 (BioTek) kull 2 min għal siegħa.Il-qarrej tal-pjanċa jieħu kejl tal-luminixxenza kull 2 minuti matul din is-siegħa.Is-somma tal-31 qari kollha ġiet ikkalkulata biex tagħti l-valur għal kull bir.Il-valur stmat għar-rispons MAMP għal kull ġenotip ġie kkalkulat bħala (valur medju tal-luminixxenza tat-tliet bjar sperimentali—il-valur tal-bir finta) -minus il-valur medju tal-bir vojt.Il-valuri tal-bir vojt kienu konsistentement qrib iż-żero.
Diski tal-weraq talNicotiana benthamiana, linja waħda tas-sorgu b'rispons għoli (SC0003), u linja waħda tas-sorgu b'rispons baxx (PI 6069) ġew inklużi wkoll bħala kontrolli f'kull pjanċa ta '96-bir għal skopijiet ta' kontroll tal-kwalità.
B. cookeipreparazzjoni u inokulazzjoni ta' inokula
B. cookeiinoculum kien ippreparat kif deskritt qabel.Fil-qosor, il-ħbub tas-sorgu ġew mxarrba fl-ilma għal tlett ijiem, imlaħlaħ, miġbuda fi flasks konikali ta '1L u awtoklavati għal siegħa f'15psi u 121 °C.Il-ħbub imbagħad ġew imlaqqma b'madwar 5 ml ta' miċelja maċerata minn kultura friska ta'B. cookeiLSLP18 jiżola u jitħalla għal ġimagħtejn f'temperatura tal-kamra, ħawwad il-garafini kull 3 ijiem.Wara ġimagħtejn, il-ħbub tas-sorgu infestati mill-fungus ġew imnixxfa bl-arja u mbagħad maħżuna f'4 °C sakemm tlaqqmu fil-għalqa.L-istess inoculum intuża għall-prova kollha u sar frisk kull sena.Għat-tilqim, 6-10 ħbub infestati tpoġġew fil-whirl ta 'pjanti tas-sorgu ta' 4-5 ġimgħat.L-ispori prodotti minn dawn il-fungi bdew l-infezzjoni fil-pjanti żgħar tas-sorgu fi żmien ġimgħa.
Preparazzjoni taż-żerriegħa
Qabel it-tħawwil fil-qasam żerriegħa tas-sorgu ġiet ittrattata b'taħlita ta 'fungiċida, insettiċida, u safener li fiha ~ 1% Spirato 480 FS fungiċida, 4% Sebring 480 FS funġiċida, 3% Sorpro 940 ES żerriegħa safener.Imbagħad iż-żrieragħ ġew imnixxfa bl-arja għal 3 ijiem li pprovdew kisja rqiqa ta 'din it-taħlita madwar iż-żrieragħ.Is-safener ippermetta l-użu tal-erbiċida Dual Magnum bħala trattament ta 'qabel l-emerġenza.
Evalwazzjoni tar-reżistenza Target Leaf Spot
L-SCP tħawlu fl-Istazzjon tar-Riċerka Ċentrali tal-Uċuħ f'Clayton, NC fl-14-15 ta 'Ġunju 2017 u l-20 ta' Ġunju 2018 f'disinn ta 'blokk komplut randomised b'żewġ repliki sperimentali f'kull każ.L-esperimenti ġew imħawla f'ringieli singoli ta '1.8 m b'wisa' ta 'ringiela ta' 0.9 m bl-użu ta 'żerriegħa 10 għal kull plott.Żewġ ringieli tal-fruntiera ġew imħawla madwar il-periferija ta 'kull esperiment biex jipprevjenu l-effetti tat-tarf.L-esperimenti ġew mlaqqma fl-20 ta’ Lulju 2017 u fl-20 ta’ Lulju 2018 f’liema punt il-pjanti tas-sorgu kienu fl-istadju tat-tkabbir 3. Il-klassifikazzjonijiet ittieħdu fuq skali minn wieħed sa disa’, fejn pjanti li ma juru l-ebda sinjali ta’ mard ġew ikkalkulati bħala disa’ u kompletament pjanti mejta kienu skurjati bħala wieħed.Ittieħdu żewġ klassifikazzjonijiet fl-2017 u erba’ qari fl-2018 li bdew ġimgħatejn wara t-tilqim kull sena.sAUDPC (erja standardizzata taħt il-kurva tal-progressjoni tal-marda) ġiet ikkalkulata kif deskritt qabel.
Ħin tal-post: Apr-01-2021