Materjali tal-pjanti u tal-patoġeni
Popolazzjoni ta' mmappjar ta' assoċjazzjoni tas-sorgu magħrufa bħala l-popolazzjoni ta' konverżjoni tas-sorgu (SCP) ġiet ipprovduta minn Dr. Pat Brown fl-Università ta' Illinois (issa f'UC Davis). Din ġiet deskritta qabel u hija ġabra ta' linji diversi konvertiti għal insensittività għall-fotoperjodu u statura iżgħar biex jiffaċilitaw it-tkabbir u l-iżvilupp tal-pjanti f'ambjenti tal-Istati Uniti. 510 linji minn din il-popolazzjoni ntużaw f'dan l-istudju għalkemm minħabba ġerminazzjoni ħażina u kwistjonijiet oħra ta' kontroll tal-kwalità, mhux il-linji kollha ntużaw fl-analiżi tat-tliet karatteristiċi kollha. Fl-aħħar mill-aħħar, dejta minn 345 linja ntużat għall-analiżi tar-rispons tal-kitina, 472 linja għar-rispons tal-flg22, u 456 għar-reżistenza għat-TLS.B. cookeiIr-razza LSLP18 inkisbet mingħand Dr. Burt Bluhm fl-Università ta' Arkansas.
Kejl tar-rispons tal-MAMP
F'dan l-istudju ntużaw żewġ MAMPs differenti flg22, (katalgu Genscript # RP19986), u chitin. Il-pjanti tas-sorgu tkabbru f'inserzjonijiet imqiegħda fuq pjani mimlija bil-ħamrija (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) fis-serra. Il-pjanti ingħataw l-ilma l-jum ta' qabel il-ġbir tal-kampjun biex tiġi evitata umdità żejda fil-weraq fil-jum tal-ġbir.
Il-linji ġew magħżula b'mod każwali u, għal raġunijiet loġistiċi, tħawlu fi gruppi ta' 60 linja. Għal kull linja, tħawlu tliet 'qsari' b'żewġ żrieragħ għal kull linja. Gruppi sussegwenti tħawlu hekk kif il-grupp preċedenti ġie pproċessat sakemm il-popolazzjoni kollha ġiet ivvalutata. Saru żewġ ġirjiet sperimentali għaż-żewġ MAMPs bil-ġenotipi magħżula b'mod każwali mill-ġdid f'kull wieħed miż-żewġ ġirjiet.
L-assaġġi ROS twettqu kif deskritt qabel. Fil-qosor, għal kull linja, sitt żrieragħ ġew imħawla fi 3 qsari differenti. Min-nebbieta li rriżultaw, tlieta ntgħażlu abbażi tal-uniformità. In-nebbieta li dehru mhux tas-soltu jew li kienu sinifikament itwal jew iqsar mill-maġġoranza ma ntużawx. Erba’ diski tal-weraq b’dijametru ta’ 3 mm tneħħew mill-aktar parti wiesgħa tar-raba’ werqa ta’ tliet pjanti differenti tas-sorgu ta’ 15-il jum. Diska waħda għal kull werqa minn żewġ pjanti u żewġ diski minn pjanta waħda, bit-tieni diska ssir il-kontroll tal-ilma (ara hawn taħt). Id-diski tpoġġew individwalment f’wiċċ l-ilma fuq 50 µl H20 fi pjanċa sewda ta’ 96-bir, issiġillati b’siġill tal-aluminju biex tiġi evitata l-espożizzjoni għad-dawl, u nżammu f’temperatura tal-kamra matul il-lejl. L-għada filgħodu saret soluzzjoni ta' reazzjoni bl-użu ta' 2 mg/ml sonda kemiluminexxenti L-012 (Wako, katalogu # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Tip VI-A, Sigma-Aldrich, katalogu # P6782), u 100 mg/ml Chitin jew 2 μM ta' Flg22. 50 µl ta' din is-soluzzjoni ta' reazzjoni ġew miżjuda ma' tlieta mill-erba' bjar. Ir-raba' bjar kien kontroll finta, li miegħu ġiet miżjuda s-soluzzjoni ta' reazzjoni eskluża l-MAMP. Erba' bjar vojta li kien fihom biss ilma ġew inklużi wkoll f'kull pjanċa.
Wara li żdiedet is-soluzzjoni tar-reazzjoni, il-luminexxenza tkejlet bl-użu tal-qarrej tal-mikropjastri multi-detection SynergyTM 2 (BioTek) kull 2 minuti għal siegħa. Il-qarrej tal-pjastri jieħu kejl tal-luminexxenza kull 2 minuti matul din is-siegħa. Is-somma tal-31 qari kollha ġiet ikkalkulata biex tagħti l-valur għal kull bir. Il-valur stmat għar-rispons tal-MAMP għal kull ġenotip ġie kkalkulat bħala (valur medju tal-luminexxenza tat-tliet bjar sperimentali—il-valur tal-bir finta) -nieqes il-valur medju tal-bir vojt. Il-valuri tal-bir vojt kienu konsistentement qrib iż-żero.
Diski tal-weraq ta'Nicotiana benthamiana, linja waħda tas-sorgu b'rispons għoli (SC0003), u linja waħda tas-sorgu b'rispons baxx (PI 6069) ġew inklużi wkoll bħala kontrolli f'kull pjanċa ta' 96-bir għal skopijiet ta' kontroll tal-kwalità.
B. cookeipreparazzjoni u inokulazzjoni tal-inokulu
B. cookeiL-inokulu tħejja kif deskritt qabel. Fil-qosor, il-qmuħ tas-sorgu tgħaddsu fl-ilma għal tlett ijiem, tlaħalħu, tpoġġew fi fliexken koniċi ta' 1L u ġew awtoklavati għal siegħa f'15psi u 121°C. Il-qmuħ imbagħad ġew inokulati b'madwar 5 ml ta' miċelja maċerata minn kultura friska ta'B. cookeiIżolati LSLP18 u tħallew għal ġimagħtejn f'temperatura tal-kamra, waqt li tħawwdu l-fliexken kull 3 ijiem. Wara ġimagħtejn, il-qmuħ tas-sorgu infestati bil-fungus tnixxfu bl-arja u mbagħad inħażnu f'4 °C sakemm ġew inokulati fl-għalqa. L-istess inokulu ntuża għall-prova kollha u ġie frisk kull sena. Għall-inokulazzjoni, 6–10 qmuħ infestati tqiegħdu fil-whorl ta' pjanti tas-sorgu ta' 4–5 ġimgħat. L-ispori prodotti minn dawn il-fungi bdew l-infezzjoni fil-pjanti żgħar tas-sorgu fi żmien ġimgħa.
Tħejjija taż-żerriegħa
Qabel ma tħawlet fl-għalqa, iż-żerriegħa tas-sorgu ġiet ittrattata b'taħlita ta' funġiċida, insettiċida, u safener li kien fiha ~ 1% funġiċida Spirato 480 FS, 4% funġiċida Sebring 480 FS, 3% safener taż-żerriegħa Sorpro 940 ES. Imbagħad iż-żerriegħa tnixxfet bl-arja għal 3 ijiem, li pprovda saff irqiq ta' din it-taħlita madwar iż-żerriegħa. Is-safener ippermetta l-użu tal-erbiċida Dual Magnum bħala trattament ta' qabel it-tfaċċar.
Evalwazzjoni tar-reżistenza għat-Tibka tal-Weraq fil-Mira
L-SCP tħawwel fl-Istazzjon Ċentrali tar-Riċerka tal-Uċuħ tar-Raba’ f’Clayton, NC fl-14–15 ta’ Ġunju 2017 u fl-20 ta’ Ġunju 2018 f’disinn ta’ blokka kompluta każwali b’żewġ replikazzjonijiet sperimentali f’kull każ. L-esperimenti tħawlu f’ringieli singoli ta’ 1.8 m b’wisa’ ta’ ringiela ta’ 0.9 m bl-użu ta’ 10 żerriegħa għal kull plott. Żewġ ringieli ta’ truf tħawlu madwar il-periferija ta’ kull esperiment biex jiġu evitati effetti tat-truf. L-esperimenti ġew inokulati fl-20 ta’ Lulju 2017 u fl-20 ta’ Lulju 2018, f’liema punt il-pjanti tas-sorgu kienu fl-istadju 3 tat-tkabbir. Il-klassifikazzjonijiet ittieħdu fuq skali minn wieħed sa disgħa, fejn pjanti li ma wrew l-ebda sinjali ta’ marda ngħataw punteġġ ta’ disgħa u pjanti kompletament mejta ngħataw punteġġ ta’ wieħed. Żewġ klassifikazzjonijiet ittieħdu fl-2017 u erba’ qari fl-2018 li bdew ġimgħatejn wara l-inokulazzjoni kull sena. L-sAUDPC (erja standardizzata taħt il-kurva tal-progressjoni tal-marda) ġiet ikkalkulata kif deskritt qabel.
Ħin tal-posta: 01 ta' April 2021