In-nematodu tal-arżnu huwa endoparassita migratorju tal-kwarantina magħruf li jikkawża telf ekonomiku serju fl-ekosistemi tal-foresti tal-arżnu. L-istudju preżenti jirrevedi l-attività nematiċida ta 'indoli aloġenati kontra nematodi tal-arżnu u l-mekkaniżmu ta' azzjoni tagħhom. L-attivitajiet nematiċidi ta '5-iodoindole u avermectin (kontroll pożittiv) kontra nematodi tal-arżnu kienu simili u għoljin f'konċentrazzjonijiet baxxi (10 μg/mL). 5-iodoindole naqqas il-fekondità, l-attività riproduttiva, il-mortalità tal-embrijuni u tal-larva, u l-imġieba lokomotriċi. L-interazzjonijiet molekulari ta 'ligands ma' riċetturi tal-kanal tal-klorur li jaħdmu bil-glutamate speċifiċi għall-invertebrati jappoġġjaw l-idea li 5-iodoindole, bħall-avermectin, jorbot sewwa mas-sit attiv tar-riċettur. 5-Iodoindole indotta wkoll diversi deformazzjonijiet fenotipiċi fin-nematodi, inkluż kollass / tnaqqis anormali tal-organi u żieda fil-vakuolizzazzjoni. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-vakuoli jista 'jkollhom rwol fil-mewt medjata mill-metilazzjoni tan-nematodi. Importanti, 5-iodoindole ma kienx tossiku għaż-żewġ speċi ta 'pjanti (kaboċċi u ravanell). Għalhekk, dan l-istudju juri li l-applikazzjoni tal-iodoindole taħt kundizzjonijiet ambjentali tista 'tikkontrolla l-ħsara tad-dbiel tal-arżnu.
Nematodu tal-injam tal-arżnu (Bursaphelenchus xylophilus) jappartjeni għan-nematodi tal-injam tal-arżnu (PWN), nematodi endoparassitiċi migratorji magħrufa li jikkawżaw ħsara ekoloġika severa lill-ekosistemi tal-foresti tal-arżnu1. Il-marda tad-dbiel tal-arżnu (PWD) ikkawżata min-nematodu tal-injam tal-arżnu qed issir problema serja f'diversi kontinenti, inklużi l-Asja u l-Ewropa, u fl-Amerika ta' Fuq, in-nematodu jeqred l-ispeċi tal-arżnu introdotti1,2. It-tnaqqis tas-siġar tal-arżnu huwa problema ekonomika ewlenija, u l-prospett tat-tixrid globali tiegħu huwa inkwetanti3. L-ispeċi tal-arżnu li ġejjin huma l-aktar attakkati min-nematodu: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, u Pinus radiata4. In-nematodu tal-arżnu huwa marda serja li tista 'toqtol is-siġar tal-arżnu fi żmien ġimgħat jew xhur ta' infezzjoni. Barra minn hekk, it-tifqigħat tan-nematodi tal-arżnu huma komuni f'varjetà ta' ekosistemi, għalhekk ġew stabbiliti ktajjen ta' infezzjoni persistenti1.
Bursaphelenchus xylophilus huwa nematodu parassitiku tal-pjanti tal-kwarantina li jappartjeni għas-superfamilja Aphelenchoidea u clade 102.5. In-nematodu jiekol il-fungi u jirriproduċi fit-tessuti tal-injam tas-siġar tal-arżnu, jiżviluppa f'erba' stadji larvali differenti: L1, L2, L3, L4 u individwu adult1,6. Taħt kundizzjonijiet ta 'nuqqas ta' ikel, in-nematodu tal-arżnu jgħaddi fi stadju ta 'larva speċjalizzat - dauer, li jipparassita l-vettur tiegħu - il-ħanfusa tal-qoxra tal-arżnu (Monochamus alternatus) u jiġi trasferit għal siġar tal-arżnu b'saħħithom. F'ospiti b'saħħithom, in-nematodi jemigraw malajr permezz tat-tessuti tal-pjanti u jieklu ċelluli parenkimatużi, li jwassal għal numru ta 'reazzjonijiet ta' sensittività eċċessiva, dbiel tal-arżnu u mewt fi żmien sena wara l-infezzjoni1,7,8.
Il-kontroll bijoloġiku tan-nematodi tal-arżnu ilu sfida, b'miżuri ta' kwarantina li jmorru lura għas-seklu 20. L-istrateġiji attwali għall-kontroll tan-nematodi tal-arżnu primarjament jinvolvu trattamenti kimiċi, inkluż il-fumigazzjoni tal-injam u l-impjantazzjoni ta 'nematiċidi fi zkuk tas-siġar. In-nematicides l-aktar komunement użati huma avermectin u avermectin benzoate, li jappartjenu għall-familja avermectin. Dawn il-kimiċi għaljin huma effettivi ħafna kontra ħafna speċi ta' nematodi u huma kkunsidrati ambjentalment sikuri9. Madankollu, l-użu ripetut ta 'dawn in-nematiċidi huwa mistenni li joħloq pressjoni ta' għażla li kważi ċertament twassal għall-emerġenza ta 'nematodi ta' l-arżnu reżistenti, kif intwera għal bosta pesti ta' insetti, bħal Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella u n-nematodi Trichostrongylus colubylus u Ostertagia, li żviluppaw reżistenza għal circumcincta gradwalment10,12111211,10. Għalhekk, il-mudelli ta 'reżistenza jeħtieġ li jiġu studjati regolarment u n-nematiċidi skrinjati kontinwament biex jinstabu miżuri alternattivi, kosteffettivi u favur l-ambjent biex jikkontrollaw il-PVD. F'dawn l-aħħar għexieren ta 'snin, għadd ta' awturi pproponew l-użu ta 'estratti tal-pjanti, żjut essenzjali u volatili bħala aġenti ta' kontroll tan-nematodi13,14,15,16.
Riċentement urejna l-attività nematicidal ta' indole, molekula ta' sinjalazzjoni interċellulari u interkingdom, f'Caenorhabditis elegans 17 . Indole huwa sinjal intraċellulari mifrux fl-ekoloġija mikrobjali, li jikkontrolla bosta funzjonijiet li jaffettwaw il-fiżjoloġija tal-mikrobi, il-formazzjoni tal-ispori, l-istabbiltà tal-plasmid, ir-reżistenza għall-mediċina, il-formazzjoni tal-bijofilm u l-virulenza 18, 19 . L-attività ta' indole u d-derivattivi tiegħu kontra nematodi patoġeniċi oħra ma ġietx studjata. F'dan l-istudju, investigajna l-attività nematicidal ta '34 indoles kontra nematodi tal-arżnu u spjegajna l-mekkaniżmu ta' azzjoni tal-5-iodoindole l-aktar qawwi bl-użu ta 'mikroskopija, fotografija time-lapse, u esperimenti ta' docking molekulari, u evalwajna l-effetti tossiċi tagħha fuq pjanti bl-użu ta 'assaġġ ta' ġerminazzjoni taż-żerriegħa.
Konċentrazzjonijiet għoljin (> 1.0 mM) ta' indol ġew irrappurtati preċedentement li għandhom effett nematiċidali fuq in-nematodi17. Wara t-trattament ta 'B. xylophilus (stadji tal-ħajja mħallta) b'indol jew 33 derivattiv ta' indol differenti f'1 mM, il-mortalità ta 'B. xylophilus ġiet imkejla billi ngħaddu nematodi ħajjin u mejta fil-gruppi ta' kontroll u ttrattati. Ħames indoles urew attività nematicida sinifikanti; is-sopravivenza tal-grupp ta 'kontroll mhux ittrattat kienet 95 ± 7% wara 24 siegħa. Mill-34 indoles ittestjati, 5-iodoindole u 4-fluoroindole f'1 mM ikkawżaw mortalità ta '100%, filwaqt li 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, u 7-iodoindole ikkawżaw madwar 50% mortalità (Tabella 1).
Effett ta '5-iodoindole fuq il-formazzjoni tal-vakuoli u l-metaboliżmu tan-nematodu tal-injam tal-arżnu. (A) Effett ta 'avermectin u 5-iodoindole fuq nematodi maskili adulti, (B) bajd ta' nematodi tal-istadju L1 u (C) metaboliżmu ta 'B. xylophilus, (i) vacuoles ma ġewx osservati f'0 h, it-trattament irriżulta f' (ii) vacuoles, (iii) akkumulazzjoni ta' vacuoles multipli, (iv) fusions well, (iv) vacuoles u vacuoles (vi) formazzjoni ta' vakuoli ġganti. Vleġeġ ħomor jindikaw nefħa ta 'vakuoli, vleġeġ blu jindikaw fużjoni ta' vakuoli u vleġeġ suwed jindikaw vakuoli ġganti. Skala bar = 50 μm.
Barra minn hekk, dan l-istudju ddeskriva wkoll il-proċess sekwenzjali ta 'mewt indotta mill-metanu fin-nematodi tal-arżnu (Figura 4C). Il-mewt metanoġenika hija tip mhux apoptotiku ta 'mewt taċ-ċelluli assoċjata mal-akkumulazzjoni ta' vakuoli ċitoplasmiċi prominenti27. Id-difetti morfoloġiċi osservati fin-nematodi tal-arżnu jidhru li huma relatati mill-qrib mal-mekkaniżmu tal-mewt indotta mill-metan. Eżami mikroskopiku f'ħinijiet differenti wera li vacuoles ġganti ġew iffurmati wara 20 siegħa ta 'espożizzjoni għal 5-iodoindole (0.1 mM). Vacuoles mikroskopiċi ġew osservati wara 8 sigħat ta 'trattament, u n-numru tagħhom żdied wara 12-il siegħa. Ġew osservati diversi vacuoles kbar wara 14-il siegħa. Diversi vacuole fused kienu viżibbli b'mod ċar wara 12-16 siegħa ta 'trattament, li jindika li l-fużjoni tal-vakuole hija l-bażi tal-mekkaniżmu tal-mewt metanoġeniku. Wara 20 siegħa, instabu diversi vakuoli ġganti madwar id-dudu. Dawn l-osservazzjonijiet jirrappreżentaw l-ewwel rapport ta 'metuosis f'C. elegans.
F'dud ittrattati b'5-iodoindole, ġew osservati wkoll aggregazzjoni u qsim ta 'vakuole (Fig. 5), kif muri mill-liwi tad-dudu u r-rilaxx tal-vakuoli fl-ambjent. Tħarbit tal-vakuole kien osservat ukoll fil-membrana tal-qoxra tal-bajd, li normalment tinżamm intatta minn L2 waqt it-tfaqqis (Fig. S2 Supplimentari). Dawn l-osservazzjonijiet jappoġġjaw l-involviment ta 'akkumulazzjoni ta' fluwidu u falliment osmoregolatorju, kif ukoll ħsara taċ-ċelluli riversibbli (RCI), fil-proċess ta 'formazzjoni ta' vakuole u suppurazzjoni (Fig. 5).
Ipotizzat ir-rwol tal-jodju fil-formazzjoni tal-vakuole osservata, investigajna l-attività nematicida tal-jodur tas-sodju (NaI) u l-jodur tal-potassju (KI). Madankollu, f'konċentrazzjonijiet (0.1, 0.5 jew 1 mM), ma affettwawx la s-sopravivenza tan-nematodi jew il-formazzjoni ta 'vakuole (Fig. S5 Supplimentari), għalkemm 1 mM KI kellu effett nematicidal żgħir. Min-naħa l-oħra, 7-iodoindole (1 jew 2 mM), bħal 5-iodoindole, indotta vacuoles multipli u deformazzjonijiet strutturali (Fig. S6 Supplimentari). Iż-żewġ iodoindoles wrew karatteristiċi fenotipiċi simili fin-nematodi tal-arżnu, filwaqt li NaI u KI ma kinux. Interessanti, indole ma indottax formazzjoni ta 'vakuole f'B. xylophilus fil-konċentrazzjonijiet ittestjati (dejta mhux murija). Għalhekk, ir-riżultati kkonfermaw li l-kumpless indole-jodju huwa responsabbli għall-vakuolizzazzjoni u l-metaboliżmu ta 'B. xylophilus.
Fost l-indoles ittestjati għall-attività nematicidal, 5-iodoindole kellu l-ogħla indiċi ta 'żlieq ta' -5.89 kcal / mol, segwit minn 7-iodoindole (-4.48 kcal / mol), 4-fluoroindole (-4.33) u indole (-4.03) (Figura 6). It-twaħħil qawwi ta 'l-idroġenu tas-sinsla ta' 5-iodoindole ma' leucine 218 jistabbilizza l-irbit tiegħu, filwaqt li d-derivattivi l-oħra kollha ta 'l-indol jorbtu mas-serine 260 permezz ta' bonds ta 'idroġenu tal-katina tal-ġenb. Fost iodoindoles immudellati oħra, 2-iodoindole għandu valur li torbot ta '-5.248 kcal/mol, li huwa dovut għar-rabta ewlenija tal-idroġenu tiegħu ma' lewċina 218. Twaqqif ieħor magħruf jinkludi 3-iodoindole (-4.3 kcal/mol), 4-iodoindole (-4.0 kcal/moli), u kcal/mol. (Figura Supplimentari S8). Ħafna indoles aloġenati u indole innifsu, bl-eċċezzjoni ta '5-iodoindole u 2-iodoindole, jiffurmaw rabta mas-serine 260. Il-fatt li t-twaħħil tal-idroġenu ma' leucine 218 huwa indikattiv ta' rbit effiċjenti riċettur-ligand, kif osservat għal ivermectin (Fig. ivermectin, jorbot sewwa mas-sit attiv tar-riċettur GluCL permezz tal-leucine 218 (Fig. 6 u Supplimentari Fig. S8). Nipproponu li din it-twaħħil hija meħtieġa biex tinżamm l-istruttura tal-pori miftuħa tal-kumpless GluCL u li billi torbot sewwa mas-sit attiv tar-riċettur GluCL, 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin u ivermectin għalhekk iżommu l-kanal tal-joni miftuħ u jippermettu l-assorbiment tal-fluwidu.
Docking molekulari ta' indole u indol aloġenat għal GluCL. Orjentazzjonijiet li jorbtu ta '(A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, u (D) ligands 5-iodoindole mas-sit attiv ta' GluCL. Il-proteina hija rappreżentata minn żigarella, u r-rabtiet tal-idroġenu tas-sinsla huma murija bħala linji bit-tikek isfar. (A′), (B′), (C′), u (D′) juru l-interazzjonijiet tal-ligands korrispondenti mar-residwi tal-amino aċidi tal-madwar, u r-rabtiet tal-idroġenu tal-katina tal-ġenb huma indikati minn vleġeġ bit-tikek roża.
Saru esperimenti biex jevalwaw l-effett tossiku ta '5-iodoindole fuq il-ġerminazzjoni taż-żerriegħa tal-kaboċċi u tar-ravanell. 5-iodoindole (0.05 jew 0.1 mM) jew avermectin (10 μg/mL) kellhom ftit jew xejn effett fuq il-ġerminazzjoni inizjali u l-emerġenza tal-pjanta (Figura 7). Barra minn hekk, ma nstabet l-ebda differenza sinifikanti bejn ir-rata ta 'ġerminazzjoni ta' kontrolli mhux ittrattati u żrieragħ ittrattati b'5-iodoindole jew avermectin. L-effett fuq it-titwil tat-taproot u n-numru ta 'għeruq laterali ffurmati kien insinifikanti, għalkemm 1 mM (10 darbiet il-konċentrazzjoni attiva tiegħu) ta' 5-iodoindole dewwem ftit l-iżvilupp ta 'għeruq laterali. Dawn ir-riżultati jindikaw li 5-iodoindole mhuwiex tossiku għaċ-ċelloli tal-pjanti u ma jinterferixxix mal-proċessi tal-iżvilupp tal-pjanti fil-konċentrazzjonijiet studjati.
Effett ta '5-iodoindole fuq il-ġerminazzjoni taż-żerriegħa. Ġerminazzjoni, nebbieta u għeruq laterali taż-żerriegħa ta' B. oleracea u R. raphanistrum fuq Murashige u Skoog agar medium b'avermectin jew 5-iodoindole jew mingħajru. Ġerminazzjoni ġiet irreġistrata wara 3 ijiem ta 'inkubazzjoni f'22 ° C.
Dan l-istudju jirrapporta diversi każijiet ta 'qtil ta' nematodi minn indoles. Importanti, dan huwa l-ewwel rapport ta 'iodoindole li jinduċi methylation (proċess ikkawżat mill-akkumulazzjoni ta' vacuoles żgħar li gradwalment jingħaqdu fi vacuoles ġganti, li eventwalment iwasslu għal qsim tal-membrana u mewt) fil-labar tal-arżnu, b'iodoindole li juri proprjetajiet nematicidal sinifikanti simili għal dawk tan-nematicide kummerċjali avermectin.
Indoles ġew irrappurtati qabel li jeżerċitaw funzjonijiet ta 'sinjalazzjoni multipli fi prokarjoti u ewkarjoti, inkluż inibizzjoni/formazzjoni ta' bijofilm, sopravivenza batterjali, u patoġeniċità19,32,33,34. Riċentement, l-effetti terapewtiċi potenzjali ta 'indoli aloġenati, alkalojdi indoli, u derivattivi semisintetiċi indoli ġibdu interess estensiv ta' riċerka35,36,37. Pereżempju, indoli aloġenati intwerew li joqtlu ċ-ċelloli persistenti ta' Escherichia coli u Staphylococcus aureus37. Barra minn hekk, huwa ta 'interess xjentifiku li tistudja l-effikaċja ta' indoles aloġenati kontra speċi, ġeneri u renji oħra, u dan l-istudju huwa pass lejn il-kisba ta 'dan l-għan.
Hawnhekk, nipproponu mekkaniżmu għal letalità indotta minn 5-iodoindole f'C. elegans ibbażat fuq ħsara taċ-ċelluli riversibbli (RCI) u metilazzjoni (Figuri 4C u 5). Bidliet edematożi bħal nefħa u deġenerazzjoni vakuolari huma indikaturi ta 'RCI u methylation, manifestati bħala vacuoles ġganti fiċ-ċitoplasma48,49. RCI jinterferixxi mal-produzzjoni tal-enerġija billi jnaqqas il-produzzjoni tal-ATP, jikkawża falliment tal-pompa ATPase, jew ifixkel il-membrani taċ-ċelluli u jikkawża influss rapidu ta 'Na+, Ca2+, u ilma50,51,52. Vakuoli intraċitoplasmiċi jinqalgħu fiċ-ċelloli tal-annimali bħala riżultat ta 'akkumulazzjoni ta' fluwidu fiċ-ċitoplasma minħabba l-influss ta 'Ca2+ u ilma53. Interessanti, dan il-mekkaniżmu ta 'ħsara taċ-ċelluli huwa riversibbli jekk il-ħsara tkun temporanja u ċ-ċelloli jibdew jipproduċu ATP għal ċertu perjodu ta' żmien, iżda jekk il-ħsara tippersisti jew tiggrava, iċ-ċelloli jmutu.54 L-osservazzjonijiet tagħna juru li n-nematodi ttrattati b'5-iodoindole ma jistgħux jirrestawraw il-bijosintesi normali wara l-espożizzjoni għal kundizzjonijiet ta 'stress.
Il-fenotip ta 'metilazzjoni indott minn 5-iodoindole f'B. xylophilus jista' jkun dovut għall-preżenza ta 'jodju u d-distribuzzjoni molekulari tiegħu, peress li 7-iodoindole kellu inqas effett inibitorju fuq B. xylophilus minn 5-iodoindole (Tabella 1 u Figura Supplimentari S6). Dawn ir-riżultati huma parzjalment konsistenti mal-istudji ta’ Maltese et al. (2014), li rrappurtaw li t-traslokazzjoni tal-frażi tan-nitroġenu piridil fl-indol mill-para- għall-pożizzjoni meta abolit il-vakuolizzazzjoni, l-inibizzjoni tat-tkabbir u ċ-ċitotossiċità fiċ-ċelloli U251, li jissuġġerixxi li l-interazzjoni tal-molekula ma 'sit attiv speċifiku fil-proteina hija kritika27,44,45. L-interazzjonijiet bejn indoli jew indoli aloġenati u riċetturi GluCL osservati f'dan l-istudju jappoġġaw ukoll dan il-kunċett, peress li 5- u 2-iodoindole instabu li jorbtu mar-riċetturi GluCL b'mod aktar qawwi mill-indoles l-oħra eżaminati (Figura 6 u Figura Supplimentari S8). Il-jodju fit-tieni jew il-ħames pożizzjoni ta 'l-indol instab li jorbot mal-leucine 218 tar-riċettur GluCL permezz ta' bonds ta 'idroġenu tas-sinsla, filwaqt li indoles aloġenati oħra u indole innifsu jiffurmaw bonds ta' idroġenu tal-katina tal-ġenb dgħajfa b'serine 260 (Figura 6). Aħna għalhekk nispekulaw li l-lokalizzazzjoni tal-aloġenu għandha rwol importanti fl-induzzjoni ta 'deġenerazzjoni vakuolari, filwaqt li l-irbit strett ta' 5-iodoindole iżomm il-kanal tal-jone miftuħ, u b'hekk jippermetti influss rapidu ta 'fluwidu u qsim vakuolari. Madankollu, il-mekkaniżmu dettaljat ta 'azzjoni ta' 5-iodoindole għad irid jiġi determinat.
Qabel l-applikazzjoni prattika ta '5-iodoindole, l-effett tossiku tiegħu fuq il-pjanti għandu jiġi analizzat. L-esperimenti tal-ġerminazzjoni taż-żerriegħa tagħna wrew li 5-iodoindole ma kellu l-ebda effett negattiv fuq il-ġerminazzjoni taż-żerriegħa jew proċessi ta 'żvilupp sussegwenti fil-konċentrazzjonijiet studjati (Figura 7). Għalhekk, dan l-istudju jipprovdi bażi għall-użu ta '5-iodoindole fl-ambjent ekoloġiku biex jikkontrolla l-ħsara tan-nematodi tal-arżnu għas-siġar tal-arżnu.
Rapporti preċedenti wrew li t-terapija bbażata fuq l-indol tirrappreżenta approċċ potenzjali biex tiġi indirizzata l-problema tar-reżistenza għall-antibijotiċi u l-progressjoni tal-kanċer55. Barra minn hekk, indoles għandhom attivitajiet antibatteriċi, kontra l-kanċer, antiossidanti, anti-infjammatorji, antidijabetiċi, antivirali, antiproliferattivi u antituberkulożi u jistgħu jservu bħala bażi promettenti għall-iżvilupp tad-droga56,57. Dan l-istudju jissuġġerixxi għall-ewwel darba l-użu potenzjali tal-jodju bħala aġent antiparassitiku u antielmintiku.
Avermectin ġie skopert tliet deċennji ilu u rebaħ il-Premju Nobel fl-2015, u l-użu tiegħu bħala antielmintiku għadu għaddej b'mod attiv. Madankollu, minħabba l-iżvilupp mgħaġġel tar-reżistenza għall-avermectins fin-nematodi u l-pesti tal-insetti, hija meħtieġa strateġija alternattiva, bi prezz baxx u li ma tagħmilx ħsara lill-ambjent biex tikkontrolla l-infezzjoni PWN fis-siġar tal-arżnu. Dan l-istudju jirrapporta wkoll il-mekkaniżmu li bih 5-iodoindole joqtol in-nematodi tal-arżnu u dak 5-iodoindole għandu tossiċità baxxa għaċ-ċelloli tal-pjanti, li jiftaħ prospetti tajbin għall-applikazzjoni kummerċjali futura tiegħu.
L-esperimenti kollha ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Università ta 'Yeungnam, Gyeongsan, il-Korea, u l-metodi twettqu skont il-linji gwida tal-Kumitat tal-Etika tal-Università ta' Yeungnam.
Saru esperimenti ta’ inkubazzjoni tal-bajd bl-użu ta’ proċeduri stabbiliti43. Biex jiġu vvalutati r-rati tat-tfaqqis (HR), nematodi adulti ta 'ġurnata (madwar 100 mara u 100 raġel) ġew trasferiti għal dixxijiet Petri li kien fihom il-fungus u jitħallew jikbru għal 24 siegħa. Il-bajd imbagħad ġie iżolat u ttrattat b'5-iodoindole (0.05 mM u 0.1 mM) jew avermectin (10 μg/ml) bħala sospensjoni f'ilma distillat sterili. Dawn is-sospensjonijiet (500 μl; madwar 100 bajda) ġew trasferiti għall-bjar ta 'pjanċa tal-kultura tat-tessuti ta' 24 bir u inkubati f'22 °C. L-għadd L2 saru wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni iżda kienu kkunsidrati mejta jekk iċ-ċelloli ma jiċċaqilqux meta stimulati b'wajer tal-platinu fin. Dan l-esperiment sar f'żewġ stadji, kull wieħed b'sitt repetizzjonijiet. Id-dejta miż-żewġ esperimenti ġiet magħquda u ppreżentata. Il-perċentwal ta' HR huwa kkalkulat kif ġej:
Il-mortalità tal-larva ġiet ivvalutata bl-użu ta' proċeduri żviluppati qabel. Inġabru bajd tan-nematodi u l-embrijuni ġew sinkronizzati bit-tfaqqis f'ilma distillat sterili biex jiġġeneraw larva tal-istadju L2. Larva sinkronizzata (bejn wieħed u ieħor 500 nematodi) ġew ittrattati b'5-iodoindole (0.05 mM u 0.1 mM) jew avermectin (10 μg / ml) u mrobbija fuq pjanċi B. cinerea Petri. Wara 48 siegħa ta 'inkubazzjoni f'22 °C, in-nematodi inġabru f'ilma distillat sterili u ġew eżaminati għall-preżenza ta' stadji L2, L3, u L4. Il-preżenza tal-istadji L3 u L4 indikat trasformazzjoni tal-larva, filwaqt li l-preżenza tal-istadju L2 indikat l-ebda trasformazzjoni. L-immaġini ġew akkwistati bl-użu tas-Sistema ta 'Immaġini taċ-Ċelluli Diġitali iRiS™. Dan l-esperiment sar f'żewġ stadji, kull wieħed b'sitt repetizzjonijiet. Id-dejta miż-żewġ esperimenti ġiet magħquda u ppreżentata.
It-tossiċità ta '5-iodoindole u avermectin għaż-żrieragħ ġiet evalwata bl-użu ta' testijiet ta 'ġerminazzjoni fuq pjanċi tal-agar Murashige u Skoog.62 Iż-żerriegħa ta' B. oleracea u R. raphanistrum ġew l-ewwel mxarrba f'ilma distillat sterili għal ġurnata waħda, maħsula b'1 ml 100% ethanol 100% kummerċjali, sterilizzat ipoklorit) għal 15-il minuta, u aħsel ħames darbiet b'1 ml ilma sterili. Iż-żrieragħ sterilizzati mbagħad ġew ippressati fuq pjanċi tal-agar tal-ġerminazzjoni li fihom 0.86 g/l (0.2X) Murashige u Skoog medium u 0.7% agar batterjoloġiku bi jew mingħajr 5-iodoindole jew avermectin. Il-pjanċi mbagħad ġew inkubati f'22 °C, u ttieħdu stampi wara 3 ijiem ta 'inkubazzjoni. Dan l-esperiment sar f'żewġ stadji, li kull wieħed minnhom kellu sitt ripetizzjonijiet.
Ħin tal-post: Frar-26-2025